Dėl bakterinių infekcijų įvairovės reikia aiškiai nustatyti patogeną ir apibrėžti jo rūšį. Nustatyti mikroorganizmo rūšį mikrobiologams padeda jo tinctorinės savybės – mikrobo jautrumas dažymuisi įvairiais dažais. Šis metodas leidžia ištirti patogeno morfologiją. Bakterijų spalvinės savybės yra labai svarbios praktiniams ir teoriniams mikrobiologijos tyrimams.
Mikrobiniai tyrimai
Bakteriologijoje yra daug mikroorganizmų dažymo metodų. Visi jie yra pagrįsti bakterijų tonacinėmis savybėmis. Dažymas leidžia nustatyti jų formą, struktūrą, dydį, santykinę padėtį. Tai leidžia išspręsti bendrosios biologijos ir lyginamosios mikrobiologijos mikroorganizmų tipų sisteminimo problemas.
Kodėl jas dažyti
Bakterijos praktiškaiskaidrūs organizmai, o nenaudojant dažymo, jie blogai matomi įprastiniu mikroskopu. Objektams tirti galite naudoti specialius mikroskopijos tipus (fazinis kontrastas, tamsus laukas), tačiau lengviausias būdas yra dažymas, po kurio bakterijos tampa matomos įprastu šviesos mikroskopu.
Pavyzdžio paruošimas
Nepriklausomai nuo naudojamos dažymo technikos, yra vienodos tiriamo objekto paruošimo taisyklės. Šie etapai yra privalomi:
- Sterilūs instrumentai padaro dėmę ant stiklelio.
- Mėginys džiovinamas. Tai atliekama kambario temperatūroje arba naudojant džiovinimo spinteles.
- Vėliau fiksavimo etapas – mikroorganizmai prie stiklo tvirtinami specialiais junginiais.
- Tinkamas dažymas – mėginys tam tikrą laiką padengiamas dažais, po to nuplaunamas.
- Galutinis džiovinimas – mėginys vėl džiovinamas.
Dažniausi dažai
Dažniausiai naudojami dažai yra pagaminti iš anilino, kurio rūgštys skiriasi (pH). Dauguma dažiklių yra milteliai, skiedžiami alkoholiu.
Dažai, kuriuose katijonai yra dažikliai, vadinami baziniais (pH didesnis nei 7). Jais galima nudažyti mikroorganizmus raudona (rausvai raudona, safranino), violetine (metilvioletinė, tionino), mėlyna (metileno mėlyna), žalia (malachito žalia), ruda (chrizoidino) ir juoda (indulino) spalvomis.
Dažai, kuriuose dažikliai yra anijonai, vadinami rūgštiniais (pH mažesnis nei 7). Jie nudažys mėginį raudonai (eozinas), geltonai (pikrinas) arba juodai (nigrozinas).
Yra grupė neutralių dažiklių (pavyzdžiui, rodaminas B), kur ir katijonai, ir anijonai veikia kaip dažikliai.
Kultūra mirusi arba gyva
Dažymo metodai skirstomi į dvi grupes pagal tiriamojo mėginio gyvybės formą.
- Gyvybinis (visą gyvenimą trunkantis) dažymas. Šis mikroorganizmų savybių tyrimo metodas naudojamas tiriant gyvus audinius, leidžiančius stebėti mikrobų gyvybinius procesus. Šiam dažymui naudojami mažo toksiškumo ir didelės prasiskverbimo galios dažai.
- Dažymas po gyvybingumo. Tai negyvų arba žuvusių mikroorganizmų dažymas. Bakterijų tinktūrinių savybių dėka mikrobiologai nustato jų struktūrą. Būtent šis dažymas naudojamas plačiausiai.
Gramteigiamas ir gramneigiamas
Būtent šias bakterijų savybes galima rasti įvairių vaistų instrukcijose. Šis bakterijų tinktūrinių savybių tyrimo metodas pagrįstas gencijoninės violetinės spalvos dažų ir jodo fiksavimo naudojimu. Tai yra Hanso Christiano Gramo, danų gydytojo, kuris pasiūlė jį 1884 m., technika. Dėl šio dažymo bakterijos yra suskirstytos į dvi grupes:
- Grama (+) – pamėlyna(stafilokokai ir streptokokai).
- Gram (-) – dėmė nuo rausvos iki raudonos (enterobakterijos, salmonelės, E. coli).
Skirtingi dažymo rezultatai atsiranda dėl skirtingų bakterijų sienelių atspalvių savybių. Gramo dažymo metodas vis dar yra pagrindinis diagnozuojant kai kurias infekcines ligas.
Kiti dažymo būdai
Apibūdinkime dar kelis bakteriologijoje plačiai naudojamus metodus.
- Ziehl-Nelson metodas – nustato bakterijų atsparumą rūgštims. Jame nustatomi tuberkuliozės ir mikobakteriozės sukėlėjai.
- Romanovsky-Giemsa technika – acidofilines (acto rūgšties ir pieno rūgšties) bakterijas nudažo raudonai, o bazofilines (spirochetas ir pirmuonis) mėlyna spalva.
- Morozovo technika – nudažo bakterijas rudai ir padaro jų žvynelius matomus.
Sporas galima pamatyti
Tsiel dažymas fuchcinu leidžia pamatyti bakterijų sporas. Po dažymo jie yra rausvos spalvos, todėl jie aiškiai matomi mėlynų bakterijų fone. Šis metodas taip pat yra bakteriologijos įrankis ir turi didelę praktinę reikšmę.
