Atliekant diferencinį enterobakterijų ir kai kurių vibracijų nustatymą, Voges-Proskauer reakcija užima ypatingą vietą. Bandymas pagrįstas bakterijų gebėjimu fermentuoti gliukozę, kad susidarytų acetoinas.
Tyrimo proceso esmė
Mikrobiologijoje Voges-Proskauer reakcija dažnai naudojama Yersinia šeimos enterobakterijoms (įskaitant pseudotuberkuliozės ir enterokolito sukėlėjus), Escherichia coli ir sporas formuojančius aerobus atskirti. Rezultatas vizualizuojamas spalvinant terpę, kai pridedami tam tikri reagentai.
Šis testas priklauso IMViC serijai (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate santrumpa) – identifikavimo testų grupei, įskaitant skirtingus apibrėžimus:
- su indolu, remiantis triptofano skaidymu į indolą, naudojamas su Kovacs arba Ehrlich reagentu;
- naudojimasmetilrotas arba metilo raudonasis, kuris aptinka tam tikrą pH dėl gliukozės metabolizmo;
- Voges-Proskauer reakcijos, skirtos acetilmetilkarbinoliui aptikti;
- citrato panaudojimas keičiant spalvą dėl terpės šarminimo.
Proceso esmė – diagnozuotų bakterijų buvimo vizualizacija dėl jų suformuoto acetoino sąveikos su šarminiu kaliu, esant deguoniui. Acetilmetilkarbinolis oksiduojamas į diacetilą, kuris sudaro ryškiai raudoną arba rausvą junginį. Prieš pridėdami kaustinės kalio, padidinkite tyrimo jautrumą, įvesdami alfa-naftolio.
Bandymo nustatymas
Vogeso-Proskauerio reakcijos formuluotė apima išankstinį mikroorganizmų auginimą. Gryna kultūra sėjama į Clark diferencinę diagnostinę terpę, kurios variantas yra Clark sultinys (be agaro-agaro). Naudojama arba paruošta terpė, arba paruošiama savarankiškai. Sudėtis:
- 5g peptono;
- 5g gliukozės;
- 5g dvibazio kalio fosfato;
- 1L distiliato.
Tyrimo metu kultūra pasėjama sterilia bakteriologine kilpa į skystą terpę. Kiekis – 5 ml mėgintuvėlyje plius kontrolė. Inkubavimas atliekamas 35-37 laipsnių temperatūroje dvi dienas. Toliau Voges-Proskauer reakcijos tyrimas atliekamas etapais:
- 2, 5 ml sultinio kultūros perpilama į sterilų mėgintuvėlį.
- Įlašinkite šešis lašus alfa-naftolio (5 % alkoholio tirpalo).
- Pridėkite 40 %kaustinės kalio tirpalas, kurio kiekis yra 0,1 ml, arba du lašai.
- Maišymas atliekamas švelniai pakratant mėgintuvėlį.
- Įvertinkite rezultatą praėjus 15 minučių nuo eksperimento pradžios.
Alternatyvus tyrimo metodas yra inkubacija per naktį, kurios laikas sutrumpinamas iki 18 valandų arba iki paros. Be šio metodo, naudojamas ir greitasis testas: kultūra kilpa įterpiama į 2 ml terpės, inkubuojama apie keturias valandas, po to lygiu 2-3 lašų kiekiu įlašinama reagentų, išmaišoma ir rezultatas įvertinamas po dešimties minučių.
Kontrolinė medžiaga yra vienas iš Klebsiella pneumoniae pneumonijos sukėlėjų – padermė atcc 13883.
Rezultato įvertinimas
Praėjus reikiamam laikui po reagentų pridėjimo (nuo 5 iki 15 minučių), turi būti stebima vyšnių raudona spalva su ryškia teigiama reakcija, raudona ir rožinė - su silpna teigiama reakcija. Joks pakeitimas neįrašomas kaip neigiamas rezultatas.
Kausto kalio perteklius tirpale gali imituoti teigiamą reakciją, nusidažyti vario spalva. Tokiu atveju reikia užregistruoti neigiamą tiriamos kolonijos atsaką. Be to, vario dažymas atsiranda tais atvejais, kai įvertinimas atliekamas praėjus valandai po reagentų įvedimo.
Vertinant rezultatą, reikia atsižvelgti į tai, kad ilgai (daugiau nei tris dienas) auginant tiriamus mikroorganizmus, terpės parūgštėja, o tai gali lemti neteisingą tyrimo rezultatą. Reakcija gali būti švelniai teigiama arbaklaidingai neigiamas.
Bandomiesiems reagentams keliami reikalavimai
Voges-Proskauer reagentai turi atitikti tokius reikalavimus kaip tinkama koncentracija, didelis grynumas ir stabilumas, kuris pasiekiamas tinkamai laikant.
Naudoti paruoštuose bandymo rinkiniuose paprastai yra reagentų, skirtų 100 ar daugiau naudojimo atvejų, ir jie yra plastikiniuose arba tamsinto stiklo buteliukuose. Kokybę reglamentuoja atitinkama dokumentacija.
